简介

如今，生物医学钻研必要大规模的基于细胞的尝试，以经济高效的方式开发新疗法。因而，细胞造就自动化对于满足高通量要求和降低成本至关沉要。此表，自动化通过自动液体处置实现了尝试流程的无缝追忆性、尺度化和精确度，从而使细胞造就尝试越发高效。Hamilton Cell Care STAR是一款先进的、即用型工作站，专为自主治理通例细胞造就守护及将细胞接种到造就板以进行高通量尝试而设计。通过自动化这些流程，该系统显著降低尝试变异性，同时维持高精度水平。Cell Control软件直观的用户界面简化了对多种细胞造就利用的同步治理，同时持续跟踪每个过程以预防数据迷失。在此，我们演示了在Cell Control中使用“从造就槽接种"步骤（工作步骤）进行自动化细胞造就的优势，并将其利用于两种常见的细胞类型：HeLa和T47D。

将细胞悬液接种到多孔造就板中能够通过Cell Control中的多种可调节参数实现高效自动化。这对于高通量尝试尤为有益，由于它确保了一致性并显著降低了报答谬误的风险。相比之下，手动接种分歧类型的细胞，如HeLa细胞和形成菌落的T47D细胞，既拥有挑战性又耗时。手动接种常导致细胞散布不均、耗时增长及传染风险升高，因而在高通量利用中效能较低。

Cell Care STAR平台上的“从造就槽中接种"操作步骤，可实现全程可追忆、高通量、基于细胞的尝试，并提升尺度化水平。

自动化液体处置技术可有效削减孔间和板间差距，从而提高尝试的一致性。

集成成像与细胞融合度丈量可削减人为过问，从而优化工作流程效能。

图：“从造就槽中接种"的24孔和96孔工作流程。通过Cell Care STAR系统实现了全自动工作流程，蕴含细胞接种、造就、成像及细胞融合度分析。

步骤1：用户造备细胞悬液，并将其转移至6列储液槽。

步骤2：细胞自动被接种到条形码象征的24孔和96孔板中，并通过精确的体积节造进行操作。

步骤3：工作步骤实现后，造就板将自动被输送到造就箱中，并在+37°C和5%二氧化碳前提下过夜造就。

步骤4：通过Cytation 1成像仪和Gen5软件进行自动融合分析。

步骤5：用户对数据进行整顿和分析，以评估其可沉复性和变异性。

改革钻研：Cell Care STAR。通过一致性和削减尝试变异性，提升大规模细胞造就的效能。

细胞造就

细胞造就前提

HeLa细胞（Sigma-Aldrich，93021013）和T47D细胞（ECACC，85102201）在尺度组织造就前提下在增长了10%FBS的高糖DMEM（Gibco，L0101-500）中造就。

尝试流程

细胞悬浮液通过手动操作造备，具体步骤为：使用0.05%胰蛋白酶-EDTA（Fisher Scientific,25300104）消化细胞，而后以所需密度参与到6列储液池（Agilent Technologies,204284-100）中。该接种操作可通过Cell Care STAR工作步骤“从储液池接种"或手动方式实现。细胞在运输至造就箱前需静置沉淀。24幼时后，使用Cytation 1成像仪及Gen5软件（Agilent）的细胞分析工具测定细胞融合度。

接种流程

24孔板（每孔参与500μL细胞悬液 + 500μL造就基；HeLa细胞（1×10?个细胞/mL）和T47D细胞（3×10?个细胞/mL）。

96孔板（每孔参与50μL细胞悬液 + 150μL造就基；HeLa细胞（1×10?个细胞/mL）和T47D细胞（3×10?个细胞/mL））。

24幼时后，使用Cytation 1成像仪和Gen5软件（安捷伦）评估融合情况。

为了确保尝试了局的变异性和靠得住性，使用了分歧传代次数的细胞来天生生物学复制品。

系统描述

Cell Control 软件

Hamilton Cell Control软件专为自主治理复杂细胞造就守护工作流程而设计，可覆盖数天至数周的操作周期。其直观易用的界面支持通过单一点击即可实现批次设置（蕴含多个操作步骤）、试剂与吸头沉新加载，以及亏损量估算等职能。每个工作步骤均预设了一组可调整的参数（例如脱落溶液的孵育功夫、传代比例、造就基体积等），可针对分歧细胞系进行优化。

技术

Cell Care STAR系统无缝整合了多种自动化技术：

Microlab STAR CO-RE技术：确保精准的液体处置。

倾斜
？楹虷amilton加热振荡器：可能并行处置两个板。

H-Box二级生物安全柜：维持样本无菌状态并确保操作人员安全。

Cell Control软件：实现对复杂细胞造就守护工作流程的直接且无缝治理。

细胞节造工作步骤：建设11种可调节的、即用型预编程、经过测试和验证的步骤，合用于6孔、24孔和96孔板体式，并支持工作流程的自动化追踪。

台面温控：确保试剂和样本的温度一致。

Cytation 1细胞成像仪：自动进行细胞密度监测和数据分析。

将HeLa和T47D细胞造备成细胞悬液，并将其接种到两个24孔板或五个96孔板中，接种方式可为手动操作或使用Cell Care STAR自动化系统。细胞被成像，并在接种后24幼时丈量细胞融合度。为了评估沉复性，推算了统一板内分歧孔之间细胞融合度的变异系数（CV）以及分歧板之间均匀细胞融合度的变异系数（CV）。

使用Cell Care STAR进行自动化处置后，两种细胞类型在细胞造就板中的细胞融合度变异显著降低。对于接种于24孔板的HeLa细胞，与手动接种相比，自动化接种使孔间细胞融合度的CV降低了41.2%（p<0.05），板间CV降低了41.3%。

在96孔板中，与手动接种相比，自动接种HeLa细胞导致孔间变异系数（CV）降低43.6%（p<0.001），板间变异系数（CV）降低75.1%（p<0.05）。

对于接种于24孔板的T47D细胞，与手动接种相比，自动接种导致孔间细胞融合度的变异系数（CV）降低33.9%（p<0.05），板间变异系数降低56%（p<0.05）。

在96孔板中，使用自动化步骤接种T47D细胞时，与经验丰硕的操作员进行手动处置相比，孔间细胞融合度的变异系数（CV）降低了40.2%（p<0.05），板间变异系数（CV）降低了60.2%（p<0.05）。

Seeding From Trough: HeLa

Seeding From Trough: T47D

当比力自动化与手动细胞接种时，细胞融合度的变异系数（%CV）。

会商/总结

自动化细胞造就工作流程可提升尝试的可沉复性、效能及可扩大性。Cell Care STAR的“从造就槽接种"工作步骤通过以下方式提升尝试靠得住性：

-      通过精准的液体处置技术，最大限度地削减报答谬误。

-      削减钻研人员的手动操作功夫。

-      提供细胞造就步骤的全程追忆性。

-      通过精准的液体处置技术，降低关键细胞处置步骤（如移液速度、细胞混合周期及细胞分装参数）执行过程中的变异性，从而提升数据质量。

Hamilton的Cell Care STAR是一种现成的解决规划，专为大规模生物医学钻研和药物发现而设计，解除了手动变异，同时提高了数据质量和工作流程尺度化，使科学突破更具成本效益。此表，Cell Control软件允许批量调度和过程优化，进一步提高尝试室出产率。