简介

蛋白质组学工作流程在临床诊断和生物技术行业中变得越来越沉要
，例如在医治药物监测或生物标志物检测中。出格是基于液相色谱质谱(LC-MS)的分析步骤提供了同时检测多种分析物的巨大优势(并且是定量的)。蛋白质组学工作流程传统上受到LC-MS检测功夫和样品造备通量的限度。而LC-MS设备技术和工作流程的进取此刻显著增长了能够每周处置的样本数量
，瓶颈已经转向高效、稳重、靠得住的高通量样本造备。在本利用中
，我们演示了一种全自动高通量LC-MS样品造备工作流程
，将Hamilton液体处置技术与PreOmics iST工作流程相结合。

- 节俭功夫和成本
，使96孔LC-MS样品造备的无人值守功夫增长

- 处置1-96个样品拥有矫捷性
，吸头使用至少

- 尺度化工作流程
，拥有高数据沉复性和过程安全性

流程描述

自动化iST工作流程

在Hamilton液体处置平台上处置96份样本的试剂、尝试室器皿和
？。每个步骤城市显示设备上的温度和运行功夫。凭据样品资料的分歧
，溶化前提可能分歧。消化后的肽沉新溶化后
，可将96孔板直接载入至LC-MS自动进样器中。

利用软件

操作员可通过图形用户界面界说每次运行的参数
，例如LC-MS之前的消化功夫或再增溶体积。

试剂盒描述

试剂盒蕴含使蛋白质一步变性、还原和烷基化的专有试剂
，以及进行胰蛋白酶消化的酶。最终肽纯化蕴含两个正压96孔板(iST-REG-PSI 96HT(192个样本): P.O. 00108; iST-REG-PSI 96HT(384个样本): P.O. 00112)。

技术

LC-MS样品造备尝试
，如PreOmics iST试剂盒
，在其工作流程中时时使用有机和挥发性液体。Hamilton通路中的压力系统允许通过例如抗悬滴技术(ADC)对此类液体进行靠得住的监测和节造。通路中集成的CO-RE（O型圈挤压扩张）技术允许在不必要额表运输工具的情况下
，往返于台面上的每个
？。ODTC与Hamilton PCR Comfort盖子相结合
，能够高精度、均匀地节造蛋白质消化过程中的温度
，不会因蒸发而导致液体损失。The [MPE]2提供了处置滤板的正压职能和急剧干燥样品的蒸发器
？
，无需离心理。

了局

进行四项尝试以评估自动化工作流程的沉复性和不变性：

(1) 用酿酒酵母蛋白提取物进行交叉传染尝试
，批注有在[MPE]2正压过程及流程中的任何其他步骤中没有产生交叉传染。

(2) 在两个分歧日期消化来自毕赤酵母和商用人血浆的蛋白质
，并在独立尝试中获得数据。巴斯德毕赤酵母和人血浆中已鉴别蛋白的日间沉叠率均达到100% 。

(3) 依照尺度手动规划
，消化等份的巴斯德酵母菌样品。在手动日间运行中检测到98%的已鉴别蛋白。

(4) 为检测齐全的96孔板自动化运行
，处置了48份巴斯德毕赤酵母和48份商用人血浆蛋白提取物的等份试样；竦玫某叨然鞍浊慷扰
，P. pastoris和人血浆的均匀有关性别离为0.97和0.98 。

总结

验证尝试和了局批注
，PreOmics iST技术在Hamilton液体处置平台上运行很有效。用户能够通过自动化的尺度化和可沉复的工作流程
，最终在不到4幼时的总样本处置功夫内得到LC-MS级多肽。酵母、人血浆和脑脊液(CSF) 样本的成功处置(未显示)证了然在临床、生物技术和钻研环境中的合用性。