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使用FLUOREYE丈量贴壁哺乳动物细胞的融合度

简介

更新功夫:2024-12-16浏览:1501次

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简介

FLUOREYE是一种荧光检测解决规划 ,专为与现有系统无缝集成而设计 ,无需额表空间或设备 。它有两个引发波长和两个检测波长 ,可实现集成的荧光信号定量和后续均一化 ,无需用户过问 。在这里 ,我们展示FLUOREYE可用于丈量被SYBR™ Safe(一种高活络度的荧光核酸染料)染色的活细胞荧光强度 ,从而确定96孔板中造就的细胞的融合度 。因而 ,FLUOREYE将其用处扩大到细胞生物学领域 。在Hamilton自动化液体处置设备上使用FLUOREYE进行自动细胞融合度丈量 ,能够在96孔板中追踪造就细胞的成长 ,而不必要显微镜、精密的成像设备或复杂的分析软件 。依照易操作的自动化工作流程 ,把细胞用SYBR™ Safe核酸染料(Invitrogen S33102)进行染色 ,而后将造就板放在工作站台面上进行分析 。这种步骤削减了成本和用户过问 ,同时提高了可沉复性和通量 。

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利益

1. 在细胞检测或细胞造就的自动化解决规划中 ,它是一种丈量细胞融合度的实用、经济高效的工具 。

2. 无需着手就能够自动选择相宜的功夫点起头细胞造就尝试、传代或进行细胞增殖尝试 。

3. 高度可沉复、尺度化和正确的细胞融合度测定步骤 。

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使用Hamilton FLUOREYE自动丈量细胞融合度是传统显微镜成像的一种高性价比的代替步骤 ,也是哺乳动物细胞成长追踪的一种无人值守、易于整合的台面式解决规划 。


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细胞造就

在尺度造就前提下 ,在增长了10%FBS(Gibco ,A5256801)的高糖DMEM(Gibco,L0101-500)造就基中造就HEK293细胞 。尝试前一天 ,对细胞进行计数 ,并将其接种在玄色96孔板(Greiner CELLSTAR 655090)中 。SYBR™ Safe染色和FLUOREYE丈量在Hamilton Microlab STAR平台上进行 。为预防移液过程中细胞脱落 ,每一步操作实现后 ,孔中都要留出至少50µL的液体 。用成长造就基将50µL SYBR Safe染料稀释到500倍 ,而后每孔参与50µL染色液 ,最终稀释到1000倍 。

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用户将细胞放回造就箱造就30分钟 。造就实现后 ,将96孔板沉新放到STAR平台上 。洗濯细胞并代替为D-PBS造就基 ,以削减布景荧光 。FLUOREYE丈量在470nm波长下进行 ,LED功率为40 。为了将测得的强杜纂细胞融合度进行定量比力 ,进行了手动显微镜查抄 。


使用ImageJ软件进行成像和融合度分析

用于融合度丈量的亮 。˙F)图像由建设5倍物镜和Axiocam 305成像装置的蔡司Axiovert 5显微镜拍摄 。对BF的tiff图像体式进行裁剪以削减孔壁阴影 ,并使用ImageJ(1.54f 版)进行分析 。丈量像素面积 ,并以总覆盖面积的百分比暗示融合度 。


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技术

FLUOREYE体积幼巧 ,所需空间极幼 ,可轻松集成到现有设备中 ,升级到荧光检测解决规划 ,而无需昂贵的整合、表罩、运输设备或为预防碰撞所进行的编程工作 。FLUOREYE拥有两个引发波长和两个检测波长 ,可进行集成的荧光定量 ,随后无需用户过问的均一化使之可与目前市场上的很多试剂盒兼容 。


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了局

用SYBR Safe核酸染料对HEK293细胞进行染色 ,而后用FLUOREYE在470nm波长下丈量荧光强度 。每孔强杜纂BF显微镜成像推算出的融合度有关 。总体而言 ,现实细胞融合与FLUOREYE丈量的荧光强度之间存在很强的有关性(R2=0.976) 。细胞聚合度和荧光强度之间的线性有关在10% - 80%之间尤为正确 ,而在密度较高时 ,差距增大 ,这可能是由于细胞压实和过度成长造成的 。此表 ,FLUOREYE读数显示 ,细胞融合度在10 - 80%之间时 ,复孔之间的差距极度 。–V <8%) 。

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